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?. ??????-??-?????-?-?????????-??-???, Normalization of Uveal Melanoma Hi-C data-Example of intrachromosomal contact maps on both uveal melanoma models (MP41/MP46), using different normalization approaches (raw data, ICE, LOIC, or CAIC normalized data). The Hi-C 1D profile (sum of genome-wide contacts) is represented below each contact maps. 3.3 Application to Uveal Melanoma Hi-C data on MP41 (Bap1 wildtype) and MP46 (Bap1 mutated) uveal melanoma tumors, and normal melanocytes, regardless their copy number profile. Figure 3.5: Chromosome compartment switches between Bap1 wiltype and mutated tumors.-Pie chart showing the fraction of compartment changes between normal melanocytes, MP41 and MP46 tumors. 'A' and 'B' represent the open/closed compartments, respectively. 'A? >B' represents compartments that swith from an open to a close state. 'B? >A' represents compartments that swith from a close to an open state, vol.3

C. Organization-;-li, Genes in gray are not expressed (TPM < 1). D. Status of Myc binding on the promoter of constitutive escapees (gray ; no Myc binding detected, red ; Myc binds both alleles, yellow ; Myc binding was detected in only one allele.) E. Status of Myc binding on the promoters of tumor specific escapees. F. Expression level of constitutive escapees. G. Expression level of tumor specific escapees. Genes with an expression value higher than 20 TPM are indicated. 4.2 Results Constitutive escapees (Xist, Kdm5C, Kdm6a, Eif2s3x,Ddx3x ) were globally highly expressed in all samples (Figure 4.4F), and are associated with Myc binding at their promoters on both alleles in liver tumors samples (Figure 4.4D). The Jpx (2010000i03rik ),Ftx (B230206F22Rik ) or 5530601H04Rik genes, which are frequently described as escapees, are not expressed in the normal XistKO sample (<1 TPM), whereas they are found lowly expressed in tumor samples (2.6 TPM in average). Interestingly, the Kdm6a gene (Utx, a histone demethylase) was found to no longer escape in the RC10 tumor sample. We defined as tumor-specific escapees those genes found as escapees in the Xi chromosome of tumor samples but not in normal XistKO samples (Figure 4.4B,C). We thus detected 37 tumor-specific escapees, mainly in the RC10/RC11 samples. Interestingly, 25 of these genes are not reported as known escapees, MOUSE LIVER TUMORS Figure 4.4: Constitutive and tumor-specific Xi escapees-A. Fraction of genes called as escapees in XistKO and tumor samples based on allele-specific expression ratios and allele-specific H3K27ac/H3K9ac histone marks.B, 2016.

-. For-chip and R. Giorgetti, First, using Hi-C data at 40Kb resolution, we investigated how TADs are organized in normal (XistKO) and Myc-induced tumor liver cells (Figure 4.5). In other mouse cell type, such as Neural Progenitro Cells (NPC), the Xa chromosome is structured in sub-megabase TADs and compartiments whereas the Xi chromosome globally presents no TADs or compartiments, normal XistKO and Myc-induced tumors, 2016.

, In the following analysis, we focused on TADs. In addition, to avoid any technical bias in Hi-C experiments, we generated new Hi-C data from NPC using exactly the same experimental protocol than for normal XistKO and Myc

C. Mouse, Insulation profiles of liver XistKO and tumor samples-Allele-specific Hi-C contact maps of short range contacts along the diagonal (40kb resolution). Active and inactive X chromosomes of each sample are represented, as well as the difference of insulation scores between both chromosomes, LIVER TUMORS Figure, vol.4

C. Organization, MOUSE LIVER TUMORS

, Allele-specific mapping In order to avoid biases in allele-specific analysis, all sequencing data (RNA-seq, ChIPseq, Hi-C) were processed using the same strategy and aligned on a N-masked reference genome. SNPs position and genotype between Bl6/Cast (XistKO) and FVB/Cast genomes were gathered from the Mouse Genome Project. The SNPsplit software, 2016.

K. , )) and the RefSeq gene annotation. Raw reads count were then transformed into Transcript Per Million (TPM) values to detect expressed (TPM>1) and non-expressed genes (TPM?1), All SNPs between parental genotypes were therefore replaced by a 'N' base on the reference genome in order to avoid mapping biases. All sequencing dataset were aligned on these N-masked genomes. RNA-seq reads were aligned with the Tophat software (v2.1.0, 2008.

. Wingett, Hi-C data were aligned on the N-masked reference genome and processed by the SNPsplit and HICUP pipelines, 2015.

C. Organization, Copy number profile of Tet-myc and XistKO liver samples-Copy number profiles have been extracted from Hi-C data as previously discussed. Briefly, Hi-C contact maps were summarized in 1D by summing up the contact of each genomic locus (250Kb resolution), Myc binding motifs on automosomes-Binding motifs detected on Myc ChIP-seq samples, vol.8

C. Organization, Red points represent X escapees detected in both RNA and ChIP-seq data. Blue (resp. green) points are ChIP-seq (resp. RNA) specific escapees. 4.5 Supplementary Figures Figure 4.11: Chromatin changes at the escapees loci-A. Exemple of the Kdm6a constitutive escapee. Hi-C profile are represented with insulation score (Iscore), H3K27ac, H3K9ac, H3K27me3, Myc, and gene expression profiles. UCSC view centered on the promoter of the gene. Histone profile from the Xa (green) and Xi (red) are superimposed. B. Same representation for two tumor specific escapees, MOUSE LIVER TUMORS Figure 4, vol.10

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