Synthesis of vitamin D haptens and production of monoclonal anti-25-hydroxyvitamin D antibodies for the optimization of a simultaneous 25-hydroxyvitamins D2 and D3 immunoassay

Préparation d'haptènes de la vitamine D et obtention d'anticorps monoclonaux anti 25 hydroxyvitamine D pour la mise au point d'un immunodosage simultané des deux 25 hydroxyvitamines D2 et D3

Sébastien Penlou (1)

1 Interactions stéroïdes-protéines et applications immunodiagnostiques et biocliniques

Vitamin D status can be determined by a radioimmunoassay measurement of 25-hydroxyvitamins D2 and D3 in plasma. For this purpose, 5 vitamin D haptens with different terminal carboxylic acid side chains were synthesised from vitamin D2. Rabbits, rats and mouse antibodies were generated by immunisation with bovine serum albumin conjugates of these 5 haptens. Histamine conjugates gave precursors of the radioiodinated tracers. 25-hydroxyvitamin D2 and D3 antibodies were obtained from all these animals with more or less equal recognition. Spleen cells from 3 rats immunised were fused with mouse myeloma cells. Two different hybridoma clones secreting monoclonal antibodies with equal response for the two vitamins and no cross-reaction with 1α,25-dihydroxyvitamin D were selected.

Dans le but d'accéder à un radioimmunodosage simultané des 25-hydroxyvitamines D2 et D3, qui sont un bon indicateur de la quantité de vitamine D disponible dans l'organisme, 5 haptènes de la vitamine D de chaînons variables à fonction acide carboxylique terminale ont été préparés par hémisynthèse à partir de la chaîne latérale de la vitamine D2. Ces 5 haptènes ont été couplés à la sérum albumine bovine pour immuniser des souris, des rats et des lapins ou bien à l'histamine pour donner des traceurs radioactifs, marqués par l'iode (125I). Les animaux ont bien répondu en sécrétant des anticorps dirigés contre les deux 25-hydroxyvitamines D2 et D3 avec des reconnaissances presque identiques. Les cellules spléniques de 3 de ces rats ont pu être fusionnées avec un myélome de souris afin de les immortaliser. Deux hybridomes sécréteurs d'anticorps monoclonaux qui reconnaissent les deux vitamines similairement et ne croisent pas avec l'hormone 1α,25-dihydroxyvitamine D ont pu être sélectionnés.

Mots clés: vitamine D; haptènes 25-hydroxyvitamines D2 et D3; immunodosage; anticorps anti-25-hydroxyvitamine D; traceurs

Domaines: Chimie organique

Sébastien Penlou. Préparation d'haptènes de la vitamine D et obtention d'anticorps monoclonaux anti 25 hydroxyvitamine D pour la mise au point d'un immunodosage simultané des deux 25 hydroxyvitamines D2 et D3. Chimie organique. Université Claude Bernard - Lyon I, 2004. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00952865⟩