Développement de nouvelles sondes oligonucléotidiques fluorescentes pour l'analyse des acides nucléiques

Résumé : De nouvelles sondes oligonucléotidiques fluorescentes spécifiques des structures d'acides nucléiques en double brin ont été obtenues. Ces oligonucléotides formant des triples hélices, sont liés par leurs extrémités 5'-ou/et 3' à une série de marqueurs fluorescents de la famille des cyanines monométhines possédant des propriétés intercalantes, par des bras polyméthylène de longueur variable. Dans tous les cas, l'hybridation des sondes avec les cibles en double brin s'accompagne d'une forte augmentation de l'intensité du signal fluorescent émis qui dépend de la structure de la cyanine et des paramètres de sa liaison aux oligonucléotides (longueur du bras de liaison et sa position de fixation sur les oligonucléotides et sur les marqueurs). En présence d'une cible simple brin, les modifications du signal ne sont pas significatives. La présence du marqueur stabilise les triples hélices. Les sondes comportant le thiazole orange, attaché par le noyau benzothiazole via un bras de liaison à huit méthylènes, présente le meilleur compromis en termes de stabilisation, d'intensité de fluorescence et d'augmentation d'intensité de fluorescence lors de l'hybridation.
Dans le but d'obtenir de nouvelles sondes utilisables en milieu cellulaire et in vivo, de nouveaux marqueurs fluorescents de type squaraine ont été synthétisés et couplés pour la première fois, à notre connaissance, à des oligonucléotides. Les conjugués correspondant émettent un signal fluorescent détectable au-delà de 650 nm et possèdent des rendements quantiques de fluorescence élevés. La photostabilité des marqueurs et des conjugués, en milieu acide faible et à 37 °C a été fortement augmentée après incorporation d'atomes de fluor sur le squaraine.
Type de document :
Thèse
Chimie. Université d'Orléans, 2008. Français
Domaine :


https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00364558
Contributeur : Brice-Loïc Renard <>
Soumis le : jeudi 26 février 2009 - 15:40:35
Dernière modification le : jeudi 8 décembre 2016 - 15:05:58
Document(s) archivé(s) le : mardi 8 juin 2010 - 21:10:34

Identifiants

  • HAL Id : tel-00364558, version 1

Citation

Brice-Loïc Renard. Développement de nouvelles sondes oligonucléotidiques fluorescentes pour l'analyse des acides nucléiques. Chimie. Université d'Orléans, 2008. Français. <tel-00364558>

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