Tyrosine phosphorylation of VE-cadherin in response to VEGF : molecular mechanisms and physiopathologic implications.
Phosphorylation sur tyrosine de la VE-cadhérine en réponse au VEGF : mécanismes moléculaires et implications physiopathologiques
Résumé
Tyrosine phosphorylation of VE-cadherin in response to VEGF : molecular mechanisms and physiopathologic implications. Vascular integrity deeply depends on endothelial cell-cell junction stability. VE- (Vascular Endothelial)-cadherin is a key component of this junctions, and its tyrosine phosphorylation is thought to be a potent mechanism that controls vascular permeability. In this report, we demonstrated the existence of a tyrosine phosphorylated form of VE-cadherin in vivo. Remarkably, VE-cadherin tyrosine phosphorylation was strongly increased in ovary and uterus during hormone-induced angiogenesis, but not in other adult quiescent tissues. For the first time, we demonstrated that Src had a permanent association with VE-cadherin, in vivo and in vitro. Moreover, in agreement with other in vitro data, we found a transient association between VEGFR-2 and VE-cadherin in vivo in angiogenic tissues. Using several approaches, we demonstrated that VE-cadherin is a direct substrate for Src kinase in VEGF signaling pathway, and that tyrosine 685 is the unique phosphorylated site. In vitro wound healing test suggested that phosphorylation of Y685 in response to VEGF may be a key event in the intracellular signaling involved in migration process of endothelial cells. Finally, studying human breast carcinoma we also demonstrated the existence of a tyrosine phosphorylated form of VE-cadherin in tumor angiogenesis and its association with a PI3K and Src family kinase activity. Overall, this data concluded that Src kinase directly phosphorylates VE-cadherin on tyrosine 685 in response to VEGF, and this phosphorylation may be in vivo a sign of an angiogenic endothelium.
L'intégrité de l'endothélium vasculaire est dépendante de l'organisation des jonctions adhérentes entre les cellules endothéliales. La VE (Vascular Endothelial)-cadhérine un constituant essentiel de ces jonctions et sa phosphorylation sur tyrosine pourrait être un moyen de régulation de la perméabilité endothéliale. Ce travail de thèse a permis de valider l'existence in vivo de la phosphorylation sur tyrosine de la VE-cadhérine. Nous montrons en effet la très forte induction de cette phosphorylation au cours de l'angiogenèse physiologique dans l'ovaire et l'utérus, par rapport aux tissus quiescents. Pour la première fois, nous rapportons l'association constante de la tyrosine kinase Src à la VE-cadhérine, à la fois in vivo et in vitro. De plus, en accord avec les données de la littérature in vitro, nous confirmons in vivo l'association transitoire du VEGFR2 à la VE-cadhérine dans un contexte angiogénique. Par différentes approches, nous apportons la preuve que la VE-cadhérine est un substrat direct de Src, et que la tyrosine 685 du domaine cytoplasmique est la cible unique de la kinase en réponse au VEGF. Grâce à un test de blessure d'HUVECs, nous montrons l'importance de la phosphorylation par Src de la tyrosine 685 dans la migration des cellules endothéliales induite par le VEGF. Enfin, l'étude de carcinomes mammaires nous as permis de démontrer l'existence d'une forme phosphorylée sur tyrosine de la VE-cadhérine également dans l'angiogenèse tumorale, et son association avec une activité kinase de type Src et PI3K. L'ensemble de ce travail permet de conclure à la phosphorylation par Src de la VEcadhérine sur la Y685 en réponse au VEGF, et suggère que cette phosphorylation représente in vivo la signature d'un endothélium activé.