DÉVELOPEMENT D'UN SYSTÈME DE RÉGÉNÉRATION D'UDP-GA1NAC POUR LA GLYCOSYLATION ENZYMATIQUE D'OLIGOSACCHARIDES ET DE PEPTIDES D'INTÉRÊT THÉRAPEUTIQUE - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2006

DEVELOPMENT OF A REGENERATION SYSTEM FOR UDP-GAINAC FOR THE ENZYMATIC GLYCOSYLATION OF OLIGOSACCHARIDES AND PEPTIDES OF THERAPEUTIC INTEREST.

DÉVELOPEMENT D'UN SYSTÈME DE RÉGÉNÉRATION D'UDP-GA1NAC POUR LA GLYCOSYLATION ENZYMATIQUE D'OLIGOSACCHARIDES ET DE PEPTIDES D'INTÉRÊT THÉRAPEUTIQUE

Résumé

The sugar N-acetylgalactosamine (Ga1NAc) is a constituent of many glycoproteins, glycolipids and proteoglycans. It is the immunodominant sugar in blood group and oncofetal antigens which are potential therapeutic targets. However, the chemical synthesis of these antigens is time consuming and expensive. In vivo, GaINAc is incorporated into glycoconjugates by specific GaINAc transferases using UDPGa1NAc as the donor substrate. At présent, the chemo-enzymatic synthesis of glycans is hampered by the difficulties involved in the synthesis of large amounts of UDPGa1NAc. To overcome these limitations we have developed the chemo-enzymatic synthesis of Ga1NAc bearing glycoconjugates based on the simple substrates Ga1NAc, UTP and creatine-P and the use of four enzymes. In this method UDP-Ga1NAc is synthesized as an intermediate and the product UDP immediately recycled to UDP-Ga1NAc. With this technique an oligosaccharide and several mg of a small glycoprotein were synthesized and the immune response of mice to the synthesized glycoprotein investigated. The system developed to synthesize the UDP-GaINAc intermediate could be adapted to produce large amounts of UDP-Ga1NAc and we could show that it accepts also derivatives of Ga1NAc which allows the rapid synthesis of •UDP-Ga1NAc analogues. These molécules have been tested as probes for the active site of polypeptide aGa1NAc transferase Tl by kinetic studies and by STD-NMR.
Le Ga1NAc est présent dans un grand nombre de glycoprotéines, protéoglycanes et glycolipides. Il est le sucre immunodominant des antigènes de groupes sanguins et oncofoetaux qui sont des cibles thérapeutiques. Cependant, la synthèse par voie chimique de ces glycoconjugués à Ga1NAc est longue et coûteuse. In vivo, le Ga1NAc est incorporé par des Ga1NActransférases, enzymes spécifiques qui transfèrent le Ga1NAc de l'UDP-GaINAc sur un substrat accepteur. Mais la synthèse chimio enzymatique des glycanes est freinée par l'obtention difficile de quantités importantes d'UDP-Ga1NAc.
Nous avons mis au point un système de synthèse chimio enzymatique de glycoconjugués à Ga1NAc qui utilise 4 enzymes et des substrats simples comme le Ga1NAc, l'UTP et la créatine-P. Ce système permet la synthèse rapide et efficace de glycopeptides et d'oligosaccharides à GaINAc ; il a été utilisé pour glycosyler l'antigène MUC1 et nous avons pu évaluer la réponse immunitaire murine contre la petite glycoprotéine obtenue.
Le système de synthèse d'UDP-Ga1NAc peut accepter certains dérivés de Ga1NAc et permettre ainsi la synthèse d'analogues d'UDP-Ga1NAc. Ces molécules sont des sondes appréciables pour étudier l'interaction entre substrats et enzymes par les techniques physicochimiques comme la STDNMR.
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Dates et versions

tel-00160999 , version 1 (09-07-2007)

Identifiants

  • HAL Id : tel-00160999 , version 1

Citer

Vanessa Bourgeau. DÉVELOPEMENT D'UN SYSTÈME DE RÉGÉNÉRATION D'UDP-GA1NAC POUR LA GLYCOSYLATION ENZYMATIQUE D'OLIGOSACCHARIDES ET DE PEPTIDES D'INTÉRÊT THÉRAPEUTIQUE. domain_other. Université d'Orléans, 2006. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00160999⟩
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