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Theses

Identification et caractérisation des sites de transport de CadA, l'ATPase-cadmium de Listeria Monocytogenes.

Résumé : Les ATPases de type P1 assurent le transport d'ions métalliques lourds tels que le Cu+, le
Cd2+ ou le Zn2+ à travers une membrane. Ce transport, qualifié d'actif parce que s'exerçant
en sens inverse du gradient électrochimique de l'ion transporté, utilise l'énergie libérée lors
de l'hydrolyse de l'ATP. Une étude accomplie en 1992 indique que 36% des Listeria
monocytogenes sont résistantes à de hautes concentrations de Cd2+. Cette résistance est
associée à la présence de plasmides, parmi lesquels pLm74 qui présente une séquence de
2136 paires de bases codant pour un polypeptide de 711 acides aminés nommé CadA. Ce
polypeptide possède les 3 séquences signatures des ATPases de type P, les motifs DKTGT,
MxTGD et TGDGxNDxP et les 2 séquences signatures des ATPases de type P1, les motifs
CXXC et CPC. L'objectif de cette thèse était la recherche des acides aminés constituant la
voie de passage du Cd2+ au sein du domaine transmembranaire de CadA. Ce travail a
nécessité l'expression de CadA dans la levure Saccharomyces cerevisiae et la
caractérisation du phénotype de sensibilité au Cd2+ induit par la présence de CadA. Il a aussi
nécessité une étude enzymatique de CadA au cours de laquelle nous avons montré que le
Cd-ATP pouvait remplacer le Mg-ATP dans le cycle enzymatique de la protéine. Quatre
hélices transmembranaires (3, 4, 6 et 8) constitueraient la voie de passage du Cd2+ dans
CadA. Au sein de ces hélices, les acides aminés M149, C354 et T684 pourraient faire partie
du site de liaison tandis que E164 et C356 pourraient être importants dans le processus de
dissociation du métal. P355 et D692 seraient nécessaires à la phosphorylation de l'enzyme.
L'étude des domaines cytoplasmiques N (liaison des nucléotides) et P (phosphorylation) de
CadA a été aussi abordée au cours de cette thèse. La caractérisation fonctionnelle
d'ATPases chimériques a mis en évidence la possibilité d'échanger le domaine de
phosphorylation entre différentes ATPases de type P.
keyword : CadA ATPase
Complete list of metadatas

https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00121780
Contributor : Chen-Chou Wu <>
Submitted on : Friday, December 22, 2006 - 7:24:00 AM
Last modification on : Thursday, January 11, 2018 - 6:15:31 AM
Document(s) archivé(s) le : Tuesday, April 6, 2010 - 8:10:20 PM

Identifiers

  • HAL Id : tel-00121780, version 1

Collections

UJF | CNRS | CEA | UGA

Citation

Chen-Chou Wu. Identification et caractérisation des sites de transport de CadA, l'ATPase-cadmium de Listeria Monocytogenes.. Biochimie [q-bio.BM]. Université Joseph-Fourier - Grenoble I, 2005. Français. ⟨tel-00121780⟩

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