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Fiche détaillée Thèses
Université d'Orléans (24/11/2006), Patrick MIDOUX (Dir.)
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IMMUNOTHÉRAPIE ANTITUMORALE PAR TRANSFERT DE L'ARN MESSAGER DE L'ANTIGÈNE MELANA/MART-1
Mockey Mickaël1

Une réponse antitumorale suite à l'induction de lymphocytes T cytotoxiques peut être générée après transfert in vitro ou directement in vivo d'ARNm d'antigènes tumoraux dans les cellules dendritiques (DCs). Cependant, peu de vecteurs permettent une introduction efficace d'ARNm dans les DCs. Nous avons élaboré des nanoparticules d'ARNm avec des polymères cationiques histidylés (polyplexes), des lipides cationiques histidylés (lipoplexes) ou un mélange des deux (lipopolyplexes). Ces vecteurs deviennent fusiogènes en milieu acide et favorisent la délivrance de l'ARNm dans le cytosol lors de son endocytose. Une optimisation de l'ARNm en ajoutant en 5' une coiffe 3'-O-méthyl-m75'GpppS'G (ARCA) et en 3' une queue de 100 adénosines (A 100) a permis la synthèse d'un transcrit ARCA-ARNm-A 100 qui permet une bonne expression de l'antigène dans les DCs. La polyéthylèneimine hisidylée a été identifiée comme étant un bon agent de transfert de l'ARNm de l'antigène du mélanome MART-1 dans les DCs matures in vitro. Pour une vaccination par injection directe de l'ARNm codant l'antigène, nous avons développé de nouvelles nanoparticules tripartites (lipopolyplexes) correspondant à des polyplexes d'ARNm ARCA-MART1-A100 avec un dérivé PEGylé de la polylysine histidylée encapsulés dans des liposomes histidylés. Par injection systémique, ces lipopolyplexes induisent un effet protecteur spécifique et significatif contre la progression tumorale cutanée et métastatique pulmonaire du mélanome murin B16F10. La mise en place d'une réponse immune de type Thl avec une forte sécrétion d'IFN-y et une activité T cytotoxique a pu être mise en évidence montrant ainsi l'intérêt des lipopolyplexes histidylés.
1 :  CBM - Centre de biophysique moléculaire
Vaccination anti-cancéreuse – cellules dendritiques – polymères cationiques – liposomes – ARNm – MelanA/MART-1 – mélanome.

ANTITUMOR IMMUNOTHERAPY BY MELANA/MART1 ANTIGEN MESSENGER RNA TRANSFER.
An antitumoral response due to the induction of cytotoxic T lymphocytes can be generated after in vitro or directly in vivo transfer of tumor antigens mRNA in dendritic cells (DCs). However, few vectors allow an effective mRNA delivery into the DCs. We developed mRNA nanoparticles with histidylated cationic polymers (polyplexes), histidylated cationic lipids (lipoplexes) or a mixture of both (lipopolyplexes). These vectors become fusiogenic in acidic medium and favor the delivery of mRNA in the cytosol during endocytosis. An mRNA optimization by adding a cap 3'-O-méthyl-m75'GpppS'G (ARCA) in 5' and a tail of 100 adenosines (A100) in 3' led to the synthesis of an ARCA-ARNm-A100 transcript which allows a high antigen expression in DCs.,The histidylated polyethyleneimine was identified as a good transfection reagent for in vitro MART-1 melanoma antigen mRNA transfer in mature DCs. For a vaccination by direct injection of mRNA antigen, we developed news ternary nanoparticles (lipopolyplexes) corresponding to polyplexes of ARCA-MART1-A100 mRNA and a PEGylated derivative of histidylated polylysine encapsulated in histidylated liposomes. Systemic injections of these lipopolyplexes induce a specific and significant protective effect against cutaneous tumour and lung metastasis progression of B16FIO murine melanoma. The induction of Thl immune response with a strong secretion of IFN-y and a T cytotoxic activity, have been prouved showing the interest of histidylated lipopolyplexes
Cancer vaccine – dendritic cells – cationic polymers – liposomes – mRNA – MelanA/MART-1 – melanoma.