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Fiche détaillée Thèses
Université d'Orléans (15/12/2006), Françoise Vovelle (Dir.)
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EXPRESSION, PURIFICATION ET ÉTUDE STRUCTURALE PAR RMN DE PEBP DE DROSOPHILE
Rautureau Gilles1

Les Phosphatidylethanolamine Binding Proteins (PEBP) sont des protéines d'environ 20 kDa conservées depuis les bactéries jusqu'aux mammifères. Elles sont caractérisées par leur capacité de fixer des ligands anioniques. Les PEBP agissent dans un grand nombre de processus cellulaires (notamment au niveau des voies de transduction du signal), et de processus physiologiques (comme la spermatogénèse) de l'organisme sain. Par ailleurs des modifications de l'expression de ces protéines sont corrélées à des situations pathologiques comme les cancers primaires et métastatiques, le diabète, la maladie d'Alzheimer et l'infertilité. Il existe 7 PEBP chez la drosophile. Durant ce travail de thèse nous avons exprimé 3 d'entre elles chez Escherichia coli et mis au point les protocoles pour les purifier en grande quantité. Parmi les protéines produites, la protéine CG7054 a été choisie pour une étude structurale par RMN. Nous avons réalisé l'attribution des signaux 'H, 13C et 'Shi du squelette peptidique et des chaînes latérales de cette protéine. L'étude de la dynamique de son squelette peptidique a été réalisée et sa structure 3D a été déterminée et analysée.
1 :  CBM - Centre de biophysique moléculaire
Résonance Magnétique Nucléaire – structure – dynamique – modélisation moléculaire – PEBP – Drosophila melanogaster – expression – purificationExpression – purification and NMIR structural study of PEBPs from Drosophila Abstract

EXPRESSION, PURIFICATION AND NMR STRUCTURAL STUDY OF PEBP3 FROM DROSOPHILIA
Phosphatidylethanolamine Binding Proteins (PEBPs) are proteins of about 20 kDa highly conserved proteins in all three kingdoms from bacteria to mammals. They are characterized by their capacity to bind anionic ligands. In addition PEBPs seem to be involved in numerous cellular processes (mostly in signalling pathways), and physiological processes (such as spermatogenesis) of the healthy organism. However modifications of the level of PEBPs expression are correlated with pathological situations like primary and metastatic cancers, diabete, Alzheimer disease and infertility.
Seven PEBPs have been isolated in drosophila. During this PhD thesis three of them have been expressed in Escherichia coli and purification protocole have been developed to produce the protein in large quantity. One of them, CG7054, was selected for a structural study by NMR. The assignment of 'H, 13C and 'Shi resonances was performed for the backbone and side chair atome. The backbone dynamics was studied and the 3D structure was determined and compared to other PEBPs.
Nuclear magnetic resonance – structure – dynamics – molecular modelling – PEBP – Drosophila melanogaster – expression – purification.