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| Detailed view | PhD thesis |
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| Université du Droit et de la Santé - Lille II (04/02/2010), Yves Rouillé (Dir.) |
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| GBF1 est un facteur cellulaire requis pour la réplication du virus de l'hépatite C |
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| Lucie Goueslain1 |
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| L'hépatite C est un problème de santé publique majeur aggravé par l'efficacité limitée des thérapies actuelles et l'absence de vaccin. Il est donc important d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles et pour cela une meilleure connaissance du cycle infectieux du virus de l'hépatite C (VHC) est indispensable. Comme pour de nombreux autres virus à ARN de polarité positive, l'étape de réplication du VHC est associée à d'importants remaniements membranaires qui conduisent à la formation d'un réseau membranaire désigné membranous web et de structures membranaires plus petites associées au reticulum endoplasmique. Cependant, la formation des complexes de réplication du VHC, en association étroite avec ces membranes cellulaires modifiées reste énigmatique. Au niveau cellulaire, de petites GTPases sont connues pour réguler la dynamique des membranes. Nos travaux montrent que l'infection par le VHC est inhibée, de façon dose-dépendante, par la bréfeldine A (BFA), un inhibiteur spécifique de l'action de GTPases de la famille ARF. L'activation des petites GTPases ARF est médiée par des facteurs d'échange nucléotidiques. En utilisant des ARN interférants ciblant les trois facteurs d'échange nucléotidique sensibles à la BFA nous avons observé que seule la réduction de l'expression de l'un d'entre eux, appelé GBF1, inhibe l'infection par le VHC. Ces résultats ont été confirmés par l'utilisation d'un inhibiteur chimique spécifique. D'autre part, la surexpression d'un mutant de GBF1 résistant à la BFA permet de restaurer l'infection par le VHC en présence de BFA. Par ailleurs, des analyses en immunofluorescence et microscopie électronique réalisées dans un contexte non réplicatif montrent que la BFA n'inhibe pas les réarrangements membranaires associés à la mise en place du membranous web. Collectivement nos résultats suggèrent que GBF1 est impliqué dans l'activité des complexes de réplication du VHC et notre travail établit un lien entre la voie de sécrétion de la cellule hôte et la réplication de l'ARN du VHC. |
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| 1: | IBLI - Institut de biologie de Lille - IBL |
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| Virus de l'hépatite C Réplication virale Bréfeldine A Golgicide A GBF1 |
| GBF1 is a cellular factor required for Hepatitis C virus replication |
| Hepatitis C is a major cause of worldwide public health problems, worsened by the lack of vaccine and effective treatment. Therefore it is important to identify new potential therapeutic targets with an aim of developing more efficient treatments. For that, a better knowledge of the replicative cycle of hepatitis C virus (HCV) is essential. As observed for many other plus-strand RNA viruses, HCV induces the formation of membrane alterations referred to as membranous webs, which are sites of RNA replication. In addition, HCV RNA replication also occurs in smaller membrane structures that are associated with the endoplasmic reticulum. However, cellular mechanisms involved in the formation of HCV replication complexes remain largely unknown. Here, we used brefeldin A (BFA) to investigate cellular mechanisms involved in HCV infection. BFA acts on cell membranes by interfering with the activation of several members of the family of ADP-ribosylation factors (ARF), which can lead to a wide range of inhibitory actions on membrane-associated mechanisms of the secretory and endocytic pathways. Our data show that HCV RNA replication is highly sensitive to BFA. Individual knockdown of the cellular targets of BFA using RNA interference and use of a specific pharmacological inhibitor identified GBF1, a guanine nucleotide exchange factor for small GTPases of the ARF family, as a host factor critically involved in HCV replication. Furthermore, overexpression of a BFA-resistant GBF1 mutant rescued HCV replication in BFA-treated cells, indicating that GBF1 is the BFA sensitive factor required for HCV replication. Finally, immunofluorescence and electron microscopy analyses indicated that BFA does not block the formation of membranous weblike structures induced by expression of HCV proteins in a non-replicative context, suggesting that GBF1 is probably not involved in the formation of HCV replication complexes, but rather in their activity. Altogether, our results highlight a functional connection between the early secretory pathway and HCV RNA replication. |
| Hepatitis C virus Viral replication Brefeldin A Golgicide A GBF1 |
| tel-00480397, version 1 | |
| http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00480397 | |
| oai:tel.archives-ouvertes.fr:tel-00480397 | |
| From: Lucie Goueslain | |
| Submitted on: Monday, 10 May 2010 19:42:38 | |
| Updated on: Tuesday, 11 May 2010 08:34:52 | |
