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Université Pierre et Marie Curie - Paris VI (08/09/2006), Emanuel Bertrand (Dir.)
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CohentannoudjiPhd2006.pdf(3.1 MB)
CINETIQUE DE REACTIONS LIGAND-RECEPTEUR EN SURFACE - étude fondée sur l'utilisation de colloïdes magnétiques
Laetitia Cohen-Tannoudji1

Ce manuscrit présente une étude des cinétiques de réactions ligand-récepteur sur des surfaces en regard, fondée sur l'utilisation de particules magnétiques colloïdales. Notre démarche repose sur la mesure de cinétiques de formation de doublets indépendants de particules, déclenchée par l'application d'un champ magnétique. Ces mesures sont directement reliées aux constantes cinétiques du couple ligand-récepteur à la surface des particules magnétiques. En considérant le couple streptavidine-biotine, nous avons validé notre approche et mis en évidence une source de variabilité des constantes d'association en surface : le degré de confinement des réactifs sur les surfaces. Pour les configurations les plus rapides, nous avons appréhendé la constante d'association comme limitée par des processus de diffusion, associés à la dynamique des particules colloïdales. Pour les configurations les plus lentes, où les réactifs sont les plus confinés en surface, le ralentissement observé est attribué à une diminution de l'efficacité des rencontres entre réactifs. Nous avons également étudié la cinétique d'association entre cadhérines, molécules directement impliquées dans l'adhésion cellulaire. Nous avons mis en évidence l'influence des conditions de contact sur l'état d'adhésion entre cadhérines. Pour les deux états d'adhésion « profonds » observés, nous avons mesuré une constante cinétique d'association plus lente que celle de l'interaction streptavidine-biotine.
1:  PECSA - Physicochimie des Electrolytes, Colloïdes et Sciences Analytiques
colloïdes – colloïdes magnétiques – reconnaissance moléculaire – cinétique – ligand-récepteur – streptavidine-biotine – cadhérine – adhésion cellulaire

A new general methodology based on magnetic colloids to study the recognition kinetics of tethered biomolecules is introduced here. By tuning the architecture of the tethers that link molecules to surfaces, we explain the large diversity of observed association times. We thus studied the association kinetics between a streptavidin and a biotin grafted on two opposite surfaces. We also considered the case of cellular adhesion molecules, the cadherins, for which we measured an association kinetic constant smaller than that of the strepatividin-biotin interaction.

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