Ovarian cryopreservation. Human and ovine in vitro folliculogenesis
Cryoconservation ovarienne : Étude de la folliculogenèse in vitro chez l'ovin et chez
l'humain
Résumé
Culture of ovarian cortex can be an alternative to autograft after ovarian cryopreservation. To improve follicular survival after freezing we evaluated the influence of the sheep cortex width; 0.5 vs 1mm, of the culture support and the cryoprotector DMSO 2M vs PROH 1.5M + sucrose 0.3M. The 1mm tissue width on millicell filter with the DMSO 2M freezing protocol displayed better results with 39% follicular survival on the 4th day of culture. On human and sheep fresh tissue, we explored a potential expression deficit in culture of Gdf9, Bmp15 and their receptors; this would explain the blocking of follicular growth in vitro. In both cases the level of ARNm and proteins Gdf9 and Bmp15 is maintained and so is the protein formula of their BmprIA, BmprIB, BmprII receptors. This study shows how survival in culture after cryopreservation can be optimised, the reason of the growth blocking remains to be determined
La culture de cortex ovarien se pose comme une alternative à l'autogreffe après autoconservation ovarienne. Pour améliorer la survie folliculaire après congélation, nous avons évalué chez la brebis l'influence de l'épaisseur de cortex ; 0,5 vs 1mm, du support de culture et du cryoprotecteur DMSO 2M vs PROH 1,5M+sucrose 0,3M. L'épaisseur de tissu de 1mm sur filtre millicell avec le protocole de congélation DMSO 2M a montré les meilleurs résultats avec 39% de survie folliculaire au 4e jour de culture. Sur tissu frais de brebis et humain, nous avons exploré un éventuel déficit d'expression en culture de Gdf9, de Bmp15 et de leur récepteurs qui expliquerait le blocage de croissance folliculaire in vitro. Dans les deux modèles la présence des ARNm et des protéines de Gdf9 et Bmp15 est maintenue et l'expression protéique de leurs récepteurs BmprIA, BmprIB, BmprII est conservée. Ce travail montre que la survie en culture après cryoconservation peut être optimisée, la cause du blocage de croissance reste à définir