Study of the part played by the type 1 phosphatase Glc7 in the inactivation of the DNA checkpoint and analysis of the interregulations between the DNA checkpoint and the spindle checkpoint in the yeast Saccharomyces cerevisiae
Etude du rôle de la protéine phosphatase de type 1 Glc7 dans l'inactivation des mécanismes de surveillance de l'ADN et analyse des interrégulations entre le mécanisme de surveillance de l'ADN et celui du fuseau mitotique chez la levure Saccharomyces cerevisiae.
Résumé
In eukaryotes, the proper transmission of the genetic material during cell division is partly realized through surveillance pathways (or checkpoints) which control DNA integrity and the equal repartition of the sister chromatids in the daughter cells. The DNA checkpoints are activated in cases of DNA damage or replication defects whereas the spindle checkpoint is triggered by defects altering all aspects of the spindle function. These surveillance pathways coordinate multiple responses including cell cycle arrests. They are widely conserved in eucaryotes and mutations affecting their components are frequently observed in human cancer cells.
DNA checkpoint activation has been thoroughly analyzed and involves many phosphorylation events. Cell cycle resumption following checkpoint inactivation is less understood but constitutes an essential step for cell survival. We have shown that the overexpression of the PP1 phosphatase Glc7 facilitates DNA checkpoint inactivation after DNA double-strand break in the yeast Saccharomyces cerevisiae.
The DNA and the spindle checkpoints used to be considered as independent pathways but we have shown that they are in fact interconnected. We have observed (i) that the activity of the spindle checkpoint alters the response to genotoxic stresses and (ii) that the phosphorylation state of two central components of the DNA checkpoint, Rad53 and Rad9, is modified when the spindle checkpoint is activated. We present here the characterization of these post-translational modifications along with their potential physiological significance.
DNA checkpoint activation has been thoroughly analyzed and involves many phosphorylation events. Cell cycle resumption following checkpoint inactivation is less understood but constitutes an essential step for cell survival. We have shown that the overexpression of the PP1 phosphatase Glc7 facilitates DNA checkpoint inactivation after DNA double-strand break in the yeast Saccharomyces cerevisiae.
The DNA and the spindle checkpoints used to be considered as independent pathways but we have shown that they are in fact interconnected. We have observed (i) that the activity of the spindle checkpoint alters the response to genotoxic stresses and (ii) that the phosphorylation state of two central components of the DNA checkpoint, Rad53 and Rad9, is modified when the spindle checkpoint is activated. We present here the characterization of these post-translational modifications along with their potential physiological significance.
Chez les eucaryotes, la transmission correcte du patrimoine génétique au cours de la division cellulaire repose en partie sur l'existence de voies de surveillance ou « checkpoints » contrôlant d'une part l'intégrité de l'ADN et d'autre part la répartition équitable du génome dupliqué dans les cellules-filles au cours de la mitose. Des altérations dans la machinerie de ségrégation des chromosomes activent le checkpoint du fuseau mitotique, tandis que les checkpoints de l'ADN sont activés suite à des lésions de l'ADN ou à des défauts de la réplication. Ces systèmes de surveillance contrôlent de multiples réponses dont des arrêts de la progression du cycle de division cellulaire. Ces voies de surveillance sont très conservées chez les eucaryotes et des mutations affectant leurs composants sont fréquemment retrouvées dans des lignées tumorales humaines.
L'activation des checkpoints de l'ADN est, à ce jour, assez bien appréhendée et met en jeu de nombreux événements de phosphorylation. La reprise du cycle concomitante à la désactivation de ces checkpoints est moins bien comprise alors qu'elle constitue une étape tout aussi essentielle à la survie cellulaire. Nous avons montré que la surexpression de la protéine phosphatase de type 1 Glc7 facilitait l'inactivation des checkpoints de l'ADN en cas de cassures double-brin de l'ADN chez un eucaryote modèle, la levure Saccharomyces cerevisiae.
Les checkpoints de l'ADN et du fuseau étaient considérés comme des voies indépendantes, mais nos travaux ont montré qu'il existe des interconnections entre les deux. Nous avons observé que, d'une part, l'activité du checkpoint du fuseau et ses composants influencent la réponse au stress génotoxique, et que, d'autre part, l'état de phosphorylation de deux composants centraux des checkpoints de l'ADN, Rad53 et Rad9, était modifié en cas d'activation du checkpoint du fuseau. Nous présentons ici la caractérisation de ces modifications post-traductionnelles ainsi que la recherche de leurs significations physiologiques.
L'activation des checkpoints de l'ADN est, à ce jour, assez bien appréhendée et met en jeu de nombreux événements de phosphorylation. La reprise du cycle concomitante à la désactivation de ces checkpoints est moins bien comprise alors qu'elle constitue une étape tout aussi essentielle à la survie cellulaire. Nous avons montré que la surexpression de la protéine phosphatase de type 1 Glc7 facilitait l'inactivation des checkpoints de l'ADN en cas de cassures double-brin de l'ADN chez un eucaryote modèle, la levure Saccharomyces cerevisiae.
Les checkpoints de l'ADN et du fuseau étaient considérés comme des voies indépendantes, mais nos travaux ont montré qu'il existe des interconnections entre les deux. Nous avons observé que, d'une part, l'activité du checkpoint du fuseau et ses composants influencent la réponse au stress génotoxique, et que, d'autre part, l'état de phosphorylation de deux composants centraux des checkpoints de l'ADN, Rad53 et Rad9, était modifié en cas d'activation du checkpoint du fuseau. Nous présentons ici la caractérisation de ces modifications post-traductionnelles ainsi que la recherche de leurs significations physiologiques.