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Detailed view PhD thesis
Université Paris Sud - Paris XI (2005-07-08), Taverna Myriam (Dir.)
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Électrochromatographie capillaire. Evaluation d'une nouvelle phase stationnaire mixte et application à l'analyse de peptides et à l'établissement de cartes peptidiques
Frédéric Progent1

L'électrochromatographie capillaire (ECC) a été étudiée avec une phase stationnaire particulaire possédant un groupement ammonium quaternaire au sein d'une chaîne octadécyle. Après avoir mis au point un mode de fabrication des colonnes capillaires, j'ai étudié le flux électroosmotique (FEO), l'efficacité des pics et un nouveau paramètre, la porosité électrocinétique réelle. J'ai ainsi pu explorer le FEO perfusif, la mouillabilité de la phase stationnaire et déterminer les meilleures conditions d'analyse pour des composés variés. J'ai testé différentes estimations de la rétention chromatographique de peptides chargés en ECC et demontré les atouts de cette phase stationnaire pour l'établissement de carte peptidiques. Une comparaison CLHP/ECC a souligné la très grande différence de rétentions entre ces modes d'analyse et la profonde originalité de l'ECC, la prédominance des phénomènes électrophorétiques et un phénomène de partage à polarité de phases inversée et une faible rétention.
1:  Laboratoire de Chimie Analytique de Paris-Sud, EA 3343, Faculté de Pharmacie de Châtenay-Malabry
ECC – électrochromatographie capillaire – phase stationnaire mixte – colonne capillaire remplie de particules – peptides – cartes peptidiques – porosité électrocinétique – CLHP – rétention chromatographique – flux electroosmotique perfusif

Capillary electrochromatography and evaluation of a new mixed mode stationary phase. Application to peptide analyses and peptide mapping.
A new embedded stationary phase, with quaternary ammonium and octadecyl chain, has been investigated in capillary electrochromatography (CEC). I have developed a process to pack the capillaries with such a phase. The electroosmotic flow (EOF), peak efficiency and a new parameter: the real electrokinetic porosity have demonstrated the presence of perfusive EOF. The latter parameter appears to be also a good evaluator of stationary phase wettability. I have estimated chromatographic retention in CEC for peptides in acidic conditions and demonstrated the good ability of mixed mode stationary phase for peptide analysis and peptide mapping. A comparison HPLC/CEC has indicated a strong difference of chromatographic retention mode between these two analytical modes and the original chromatographic behaviour in CEC. In our conditions, electrophoretic mechanisms played a major role in CEC. Although no electrostatic exclusion could be evidenced, retention by reversed phase retention was quite low.
CEC – capillary electrochromatography – mixed-mode stationary phase – packed capillary columns – peptides – peptide mapping – electrokinetic porosity – HPLC – chromatographic retention – perfusive electroosmotic flow

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