Intragenic Regulation of c-fos transcription: from elongation to alternative initiation.
Régulation intragénique de la transcription de c-fos: blocage de l'élongation et promoteur alterne
Résumé
c-fos is a well-known proto-oncogene and an immediate-early gene whose role is still debated. Its transcriptional activation is very quick and transient, which requires a tight regulation.
c-fos transcriptional control by intragenic sequences was studied through two different aspects. First, a transcriptional block in the first intron was shown to occur in cultured Ltk- fibroblasts, as shown before in macrophages. This block was relieved by increasing calcium intracellular concentration, and we demonstrated that this did not require CaM-Kinases nor calcineurin, but was linked to a new calmodulin-dependent pathway that remains to be characterised.
In the second part of my thesis work, we identified dowstream the blockade region a new, very conserved intronic sequence which has many features of a promoter. This alternate promoter was shown to be active in transient transfection. We thus constructed transgenic mice carrying a b-galactosidase reporter under the control of this putative intronic promoter. Thanks to these mice we could detect the activity of this promoter during development restricted to neural structures and developing mammary gland.
We thus studied two very close new regions involved in c-fos transcriptional regulation at two different levels, and speculate that these activities are coordinated.
c-fos transcriptional control by intragenic sequences was studied through two different aspects. First, a transcriptional block in the first intron was shown to occur in cultured Ltk- fibroblasts, as shown before in macrophages. This block was relieved by increasing calcium intracellular concentration, and we demonstrated that this did not require CaM-Kinases nor calcineurin, but was linked to a new calmodulin-dependent pathway that remains to be characterised.
In the second part of my thesis work, we identified dowstream the blockade region a new, very conserved intronic sequence which has many features of a promoter. This alternate promoter was shown to be active in transient transfection. We thus constructed transgenic mice carrying a b-galactosidase reporter under the control of this putative intronic promoter. Thanks to these mice we could detect the activity of this promoter during development restricted to neural structures and developing mammary gland.
We thus studied two very close new regions involved in c-fos transcriptional regulation at two different levels, and speculate that these activities are coordinated.
c-fos est un proto-oncogène et un gène de réponse précoce. Son activation transcriptionnelle est très rapide et transitoire, ce qui suggère un contrôle très strict.
Au cours de ma thèse, nous avons abordé deux aspects de la régulation transcriptionnelle de c-fos par des séquences intragéniques. Le premier consiste en un blocage de l'allongement des transcrits dans le premier intron, dont nous avons montré qu'il intervient dans les fibroblastes Ltk-, comme cela avait été découvert dans les macrophages. Ce blocage est levé par l'augmentation de la concentration en calcium intracellulaire, et nous avons montré que ce phénomène est indépendant des CaM-Kinases et de la calcineurine, mais implique la calmoduline dans une nouvelle voie de signalisation.
Dans la seconde partie de mon travail de thèse, nous avons identifié, en aval de la région décrite ci-dessus, une nouvelle séquence intronique très fortement conservée qui possède les caractéristiques d'un promoteur. Nous avons montré que ce promoteur est fonctionnel en transfection transitoire, ce qui nous a encouragé à recourir aux souris transgéniques pour explorer ses territoires d'expression au cours du développement. Nos résultats préliminaires montrent que cette expression semble être limitée au système nerveux et aux glandes mammaires en développement.
Nous avons donc étudié deux régions régulatrices de la transcription de c-fos qui sont proches dans le gène, ce qui suggère un dialogue entre ces différentes fonctions.
Au cours de ma thèse, nous avons abordé deux aspects de la régulation transcriptionnelle de c-fos par des séquences intragéniques. Le premier consiste en un blocage de l'allongement des transcrits dans le premier intron, dont nous avons montré qu'il intervient dans les fibroblastes Ltk-, comme cela avait été découvert dans les macrophages. Ce blocage est levé par l'augmentation de la concentration en calcium intracellulaire, et nous avons montré que ce phénomène est indépendant des CaM-Kinases et de la calcineurine, mais implique la calmoduline dans une nouvelle voie de signalisation.
Dans la seconde partie de mon travail de thèse, nous avons identifié, en aval de la région décrite ci-dessus, une nouvelle séquence intronique très fortement conservée qui possède les caractéristiques d'un promoteur. Nous avons montré que ce promoteur est fonctionnel en transfection transitoire, ce qui nous a encouragé à recourir aux souris transgéniques pour explorer ses territoires d'expression au cours du développement. Nos résultats préliminaires montrent que cette expression semble être limitée au système nerveux et aux glandes mammaires en développement.
Nous avons donc étudié deux régions régulatrices de la transcription de c-fos qui sont proches dans le gène, ce qui suggère un dialogue entre ces différentes fonctions.